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ELISA試劑盒洗滌的正確方法

 發布時間:2022-11-27 點擊量:139
  ELISA試劑盒洗滌的正確方法
  ELISA靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。今天小編為大家總結ELISA試劑盒洗滌的兩大方法。
  一、浸泡式
  1.吸干或甩干孔內反應液;
  2.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
  3.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;
  4.吸干孔內液體。吸干應徹底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
  5.重復操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長浸泡時間。
  二、流水沖洗式
  初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續沖洗 2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為徹底,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。
  除了洗滌方式,還有主洗滌參數、洗滌次數等在實驗中也是至關重要的,關于洗滌實驗的優化方面,我司技術也給大家分析分析:
  ELISA試劑盒洗滌參數:
  第一、洗滌量
  自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景,那么不要猶豫,將洗滌量調為高,最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到,從而明顯增加背景。所有反應孔的洗滌量必須相同。ELISA板的制造商通常會在試劑盒的使用手冊中列出包被量。行業中通常使用的包被量是200μl。如果你的試劑盒也是這樣,那么制造商可能會建議使用300μl洗滌液進行洗滌,以便清潔整個反應孔的壁。一般來說,洗滌量越高,則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
  第二、洗滌循環的量
  【ELISA試劑盒洗滌】次數越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會降低信號強度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復洗滌三次。不過,ELISA板的制造商會對洗滌次數提出建議。一般而言,制造商包被平板需要的洗滌次數比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板,必須優化洗滌次數。
  控制洗滌量和洗滌次數的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說,96孔板的每個孔能容納330至460ul。不過,有些自動化洗板機可設置程序,分配遠遠超出這個量的洗滌液,比如1ml。它是如何做到的呢?其實很簡單,就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說,隨著分液器分配更多的液體,抽吸器也將液體吸出。這種技術能增加洗滌量,但不會溢出到其他孔中。
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